В постановке диагноза имеют значение эпидемиологические и клинические данные. Лабораторная диагностика гепатита В основывается на выявлении биохимических маркеров цитолиза, мезенхимального воспаления, холестаза и обнаружении маркеров вирусного гепатита В.
С помощью РПГА, встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ), радиоиммунного (РИА) и иммуноферментного анализа (ИФА) определяют в крови антигены. Имеет значение ПЦР-диагностика.