Биологический метод является самым чувствительным способом обнаружения туляремийных бактерий в любом исследуемом материале. Биологический метод исследования заключается в заражении лабораторных животных (морская свинка, белая мышь) результатом бубонов, взятым до 14-20-го дня болезни; соскобом со дна язвы, смешанным с физиологическим раствором, полученным до 8-12-го дня, отделяемым конъюнктивы, взятым до 15-17-го дня болезни; кровью 5-6 мл, взятой до 6го дня болезни. Исследуемый материал вводят подопытным животным подкожно или внутрибрюшно. Зараженные животные погибают от туляремии в течении 4-14 дней. Кусочки печени, селезенки, лимфатического узла и кровь засевают на желточную среду для выделения возбудителя.