4. Методы оценки иммунного статуса
Для выявления иммунодефицитных состояний возникает необходимость оценки показателей функциональной активности иммунной системы, т. е. иммунного статуса.
Оценка иммунного статуса слагается из нескольких этапов:
-
Клинико-лабораторный этап, который включает в себя:
-
сбор и оценку иммунологического анамнеза (частота инфекционных заболеваний, характер их течения, выраженность температурной реакции, наличие очагов хронической инфекции, реакции на вакцинации или введение лекарственных средств);
-
оценку результатов общего клинического анализа крови (содержание гранулоцитов, моноцитов, лимфоцитов);
-
выявление с помощью бактериологических, вирусологических и/или серологических исследований бактерионосительства и вирусоносительства.
-
Лабораторно-иммунологический этап.
На этом этапе в иммунологической лаборатории проводятся исследования, целью которых, собственно, и является качественная и количественная оценка функциональной активности иммунной системы (иммуннокомпетентных клеток). Для этого разработан ряд (набор) тестов, которые делят на тесты 1-го (ориентировочного) и 2-го (аналитического) уровней.
Тесты 1-го уровня являются ориентировочными и позволяют выявить грубые нарушения деятельности иммунной системы. Они включают в себя определение:
-
общего и относительного числа лимфоцитов,
-
основных субпопуляций (Т- и В- клетки),
-
фагоцитарной активности лейкоцитов,
-
концентрации иммуноглобулинов разных классов в сыворотке крови.
Общее (абсолютное) и относительное число лимфоцитов определяют по данным клинического анализа крови. Содержание Т- и В- лимфоцитов подсчитывают в реакции иммунофлюоресценции, используя меченые моноклональные флюоресцирующие сыворотки к специфическим поверхностным антигенным маркерам, обозначаемым символами CD (claster differentiation).
Таких антигенных маркеров известно несколько десятков, но отдельные из них характерны для того или иного типа клеток:
-
рецептор CD3 — это рецептор всех Т-лимфоцитов,
-
рецепторы CD19, 20, 21, 72 — В-лимфоцитов,
-
рецепторы CD4 — Т-хелперы,
-
рецепторы CD8 — Т-супрессоры ,
-
рецепторы CD16 — NK- клетки (натуральные киллеры).
Более доступным и простым, но менее точным и устаревшим является метод розеткообразования. Он основан на том, что В-лимфоциты могут адсорбировать на своей поверхности эритроциты мышей, а Т-лимфоциты — эритроциты барана (их также могут образовывать NK-клетки). Лимфоцит с прилипшими к нему эритроцитами — это и есть розетка, их подсчитывают в окрашенных по Романовскому-Гимзе мазках из смеси лимфоцитов и соответствующих эритроцитов.
Для оценки фагоцитарной активности нейтрофилов крови определяют процент фагоцитирующих клеток и фагоцитарный показатель (среднее количество микробных клеток, поглощенных одним лейкоцитом).
Концентрацию (уровень) иммуноглобулинов разных классов G, М, А и Е в сыворотке крови определяют в реакции преципитации в геле (радиальная иммунодиффузия по Манчини) с антиглобулиновыми сыворотками к Ig G, Ig M, IgA, Ig E, но этот метод имеет достаточно большую ошибку при определении +,- 15 %.
Тесты 2-го уровня позволяют провести более глубокий анализ состояния иммунной системы и уточнить характер дефектов, выявленных с помощью тестов 1-го уровня. К ним относятся, например, определение отдельных субклассов иммуноглобулинов (особенно Ig G, секреторного Ig A) и В-лимфоцитов, регуляторных и эффекторных клеток.
Кроме того, с помощью иммуноферментных и радиоиммунных методов можно определить концентрации отдельных цитокинов — главных регуляторных молекул, определяющих тип иммунного ответа. Например, интерлейкин-2 является обязательным компонентом иммунного ответа на любые антигены, в том числе и микробные, так как обеспечивает пролиферацию и дифференцировку Т-лимфоцитов.
