3. Методика определения групп крови
Помещение, где проводится определение группы крови, должно быть светлым, с температурой от 15 до 25 °С.
На тарелку или предметное стекло наносятся пипетками (разными!) по 1-й крупной капле сыворотки О(I), А(II), В(III). Заметив время, чистой стеклянной палочкой или чистым углом предметного стекла капли сывороток соединяются с каплями крови. Определение длится 5 минут, покачивая тарелку, затем к каждой смеси капель добавляют по 1-й капле физраствора и оценивают результаты. Лучше, если сыворотка будет 2-х различных серий. Результаты групп крови должны совпадать в обеих сериях сыворотки.
Оценка результатов изогемагглютинации:
-
изогемагглютинация. При положительной реакции в смеси появляются мельчайшие красные зернышки склеивающихся эритроцитов. Зернышки сливаются в более крупные зерна, а последние в хлопья. Сыворотка почти обесцвечивается;
-
при отрицательной реакции смесь в течение 5 мин остается равномерно окрашенной в розовый цвет и никаких зернышек не обнаруживается;
-
при работе с 3-я сыворотками групп О(I), А(II), В(III) возможны 4 комбинации реакций:
-
если все 3 сыворотки дали отрицательную реакцию, то есть смесь равномерно окрашена в розовый цвет — это О(I) группа крови;
-
если отрицательную реакцию дала только сыворотка группы А(II), а сыворотки О(I) и В(III) дали положительную реакцию, то есть появились зерна — это А(II) группа крови;
-
сыворотка группы В(II) дала отрицательную реакцию, а сыворотки группы О(I) и А(II) дали положительную — это В(III) группа крови.
-
все 3 сыворотки дали положительные реакции — испытуемая кровь АВ(IV) группы. В этом случае проводится исследование с сывороткой АВ(IV) группы.
Обратите внимание! Капли исследуемой крови должны быть в 5-10 раз меньше капель сыворотки.
Ошибки изогемагглютинации.
Невыполнение агглютинации, где она должна быть и наличие агглютинации, где ее быть не должно. Это может быть при слабом титре сыворотки плюс плохая агглютинация эритроцитов.
Наличие агглютинации, где ее быть не должно — это псевдоагглютинация, когда кучки эритроцитов образуют "монетные столбики". Покачивание тарелки или добавление физраствора их разрушают.
Панагглютинация, когда сыворотка склеивает все эритроциты, в то числе и своей группы крови. К 5-й минуте признаки агглютинации исчезают.
Имеется еще так называемая холодовая панагглютинация, когда склеивание эритроцитов происходит из-за низкой температуры воздуха (ниже 15 °С) в помещении.
Во всех этих случаях проводят либо повторную реакцию, либо по стандартным эритроцитам.
