Определение белка (количественное определение)
Принцип метода
Интенсивность помутнения при коагуляции белка сульфосалициловой кислотой пропорциональна его концентрации.
Необходимые реактивы
I. 3%-ный раствор сульфосалициловой кислоты.
II. 0,9%-ный раствор хлорида натрия.
III. Стандартный раствор альбумина — 1%-ный раствор (1 мл раствора, содержащий 10 мг альбумина): 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9%-ного раствора хлорида натрия в колбе вместимостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же раствором. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5%-ного раствора азида натрия (NaN3). При хранении в холодильнике реактив годен в течение 2 месяцев.
Специальное оборудование — фотоэлектроколориметр.
Ход исследования
В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, доливают до 5 мл 3%-ным раствором сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 590—650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете длиной оптического пути 5 мм. Контролем служит пробирка, в которой к 1,25 мл профильтрованной мочи долили до 5 мл 0,9%-ный раствор хлорида натрия. Расчет ведут по калибровочному графику, для построения которого из стандартного раствора готовят разведения, как указано в таблице.
Приготовление разведений для построения калибровочного графика
|
№ пробирки
|
Стандартный раствор мл
|
0,9% раствор хлорида натрия мл
|
Концентрация белка г/л
|
| 1 | 0,05 | 9,95 | 0,05 |
| 2 | 0,1 | 9,9 | 0,1 |
| 3 | 0,2 | 9,8 | 0,2 |
| 4 | 0,5 | 9,5 | 0,5 |
| 5 | 1,0 | 9,0 | 1,0 |
Из каждого полученного раствора берут 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.
Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.
Ложноположительные результаты могут быть получены при наличии в моче контрастных веществ, содержащих органический йод. Поэтому тест нельзя использовать у лиц, принимающих препараты йода, ложноположительный результат может быть также обусловлен приемом сульфаниламидных препаратов, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.
- Определение белка (унифицированная проба с сульфосалициловой кислотой)
- Определение белка (унифицированный метод Брандберга—Робертса—Стольникова)
- Определение белка (биуретовый метод)
- Определение белка (обнаружение в моче белка Бенс-Джонса)
- Определение альбумоз (протеоз)
- Определение глюкозы мочи
- Определение глюкозы мочи (унифицированный метод определения с помощью индикаторных полосок)
- Унифицированные методы обнаружения глюкозы в моче (проба Гайнеса)
- Унифицированные методы обнаружения глюкозы в моче (проба Бенедикта)
- Унифицированные методы обнаружения глюкозы в моче (проба Нилендера)
