Методы основаны на определении переваривающей способности желудочного содержимого в отношении различных белковых субстратов. Это методы Мета, Уголева, Пятницкого, Туголукова и др. Последний метод определения пепсина унифицирован.
Метод Туголукова. В основе лежит протеолитическое действие желудочного содержимого на сухую плазму. О содержании пепсина судят по количеству переваренного белкового субстрата. В специальную центрифужную пробирку (с оттянутым и градуированным нижним концом) вносят 1 мл профильтрованного и предварительно разведенного (1 : 100) дистиллированной водой желудочного содержимого. В контрольную пробирку помещают 1 мл прокипяченного разведенного желудочного содержимого. В обе пробирки добавляют по 2 мл 2%-ного раствора сухой плазмы (в 0,1 г растворе хлористо-водородной кислоты), инкубируют в течение 20 ч при 37 °С. После инкубации добавляют 2 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и тщательно перемешивают до получения однородной суспензии. Центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об./мин.
Измеряют величину осадка в пробирках и вычисляют показатель переваривания субстрата по формуле:
М = (А – В) * 40/А,
где М — показатель переваривания;
А — величина осадка в контроле;
В — величина осадка в опытной пробе;
40 — постоянная величина, выведенная экспериментально.
Пересчет показателей переваривания белкового субстрата (раствора сухой плазмы) на содержание пепсина в желудочном содержимом
|
Показатель переваривания (М)
|
Содержание пепсина мг/100 мл
|
Показатель переваривания (М)
|
Содержание пепсина мг/100 мл
|
Показатель переваривания (М)
|
Содержание пепсина мг/100 мл
|
Показатель переваривания (М)
|
Содержание пепсина мг/100 мл
|
| 1 | 0,5 | 11 | 3,7 | 21 | 9,0 | 31 | 68,0 |
| 2 | 0,8 | 12 | 4,0 | 22 | 10,0 | 32 | 77,0 |
| 3 | 1,0 | 13 | 4,5 | 23 | 12,0 | 33 | 86,0 |
| 4 | 1,5 | 14 | 4,7 | 24 | 16,0 | 34 | 96,0 |
| 5 | 1,7 | 15 | 5,0 | 25 | 20,0 | 35 | 106,0 |
| 6 | 2,0 | 16 | 5,5 | 26 | 27,0 | 36 | 120,0 |
| 7 | 2,5 | 17 | 6,2 | 27 | 34,0 | 37 | 150,0 |
| 8 | 2,7 | 18 | 6,7 | 28 | 42,0 | — | — |
| 9 | 3,0 | 19 | 7,5 | 29 | 50,0 | — | — |
| 10 | 3,5 | 20 | 8,0 | 30 | 59,0 | — | — |