В колбу Кьельдаля помещают 5 мл исследуемой мочи и 1 мл концентрированной серной кислоты и нагревают на электрической плитке с закрытой спиралью или на песчаной бане, не должно быть бурного кипения и образования пены, которая поднималась бы в горлышко колбы. В конце сжигания должны образовываться тяжелые белые пары, занимающие нижнюю часть колбы.
Когда материал потемнеет и объем его уменьшится примерно наполовину, добавляют несколько капель пергидроля, что способствует просветлению пробы. Сжигание проводят до тех пор, пока раствор не станет совсем светлым. После охлаждения доливают 10 мл воды и ставят на кипящую водяную баню на 5—10 мин, после чего объем пробы доводят водой до 20 мл.
Отбирают 4 мл, к которым прибавляют 0,3 мл насыщенного раствора сульфата гидразина и 1,2 мл насыщенного раствора ацетата аммония, после чего фотометрируют при длине волны 535 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см и прибавляют 0,5 мл раствора сульфонированного батофенантролина и оставляют на 1 ч, затем повторно фотометрируют в тех же условиях.
В норме этим методом железо в моче не определяется.