Определение железа по цветной реакции со спиртовым раствором батофенантролина

Принцип метода

Сывороточное железо восстанавливают тиогликолевой кислотой, белки осаждают трихлоруксусной кислотой, в фильтрате устанавливают нужную величину рН, добавляя ацетат натрия, и проводят цветную реакцию с батофенантролином. В связи с тем, что он в воде нерастворим, используют спиртовой раствор.

Необходимые реактивы

I. Кислота тиогликолевая, кислота трихлоруксусная, раствор 400 г/л.

II. Натрия ацетат, насыщенный раствор (в случае необходимости его очищают от следов железа, растворяя 500 г в 1 л воды при 37 °С). К прозрачной надосадочной жидкости добавляют раствор батофенантролина из расчета 10 мл на 1 л и этиловый спирт в количестве, равном количеству надосадочной жидкости; на холоде выпадают кристаллы СН₃СООNа * 3Н₂О.

III. Батофенантролин, 40 мг в 100 мл этанола.

IV. НСl 1 н раствор.

V. Калибровочный раствор железа: 100 мг мягкой железной проволоки растворяют в 4 мл концентрированной НСl и разводят до 1 л водой, получается раствор, содержащий 100 мкг/мл. Из него разведением в 60 раз получают раствор, содержащий 30 мкмоль/л (1,67 мкг/л).

Учитывая, что метод определения очень чувствительный, необходимо принять все меры, чтобы реактивы и посуда не содержали железа, присутствие которого выявляется при постановке холостых проб. Посуду, в том числе пробирки для взятия крови, необходимо обрабатывать разбавленной НСl, должна использоваться только деионизированная или перегнанная в стеклянной посуде вода, реактивы очищаются перекристаллизацией.

Далее по теме: