Унифицированный метод определения фосфора после осаждения белков трихлоруксуснои кислотой
Принцип метода. При осаждении белков крови трихлоруксусной кислотой все фосфолипиды осаждаются вместе с белковым сгустком, а неорганический и кислоторастворимый фосфор остаются в растворе. Белковый сгусток минерализуется нагреванием с хлорной кислотой и фосфор определяется эйконогеновым методом. В связи с тем, что белки плазмы не содержат фосфора, весь осаждаемый трихлоруксусной кислотой фосфор входит в состав фосфолипидов.
Необходимые реактивы
I. Кислота хлорная 57%-ная, ее концентрация должна быть 5,7 н, что проверяется титрованием. Если концентрация значительно ниже, что часто случается, так как препарат может содержать 40 или 50% НСlО4, соответственно увеличивается количество реактива, используемого при минерализации.
II. Кислота трихлоруксусная, 100 г/л (10%).
III. Аммоний молибденовокислый, раствор 40 г/л. Готовят, растворяя 4 г (NH4) Mo7O24 * 4H2O в 100 мл воды.
IV. Натрий кислый сернистокислый.
V. Натрий сернистокислый безводный.
VI. Эйконоген, раствор.
VII. Калибровочный раствор. Основной калибровочный раствор, содержащий 50 ммоль фосфора в 1 л, разводят водой в 50 раз, получается раствор, содержащий 1 мкмоль/мл.