Унифицированный метод определения фосфора по восстановлению фосфорно-молибденовой гетерополикислоты
Принцип метода
Белки осаждают трихлоруксусной кислотой, в кислой среде фосфорная кислота образует с молибденовой кислотой фосфорно-молибденовую гетерополикислоту, которая восстанавливается эйконогеном с образованием ярко окрашенного молибденового синего.
Необходимые реактивы
I. Кислота трихлоруксусная, раствор 100 г/л (10%).
II. Кислота серная 5 н.
III. Аммоний молибденовокислый, 5%-ный раствор готовят, растворяя 5 г (NH4)6Мо7О2 * 4Н2О в 100 мл 5 н серной кислоты.
IV. Натрий кислый сернистокислый NaHSO3 (в такой форме соль существует только в растворе, это скорее коммерческое, нежели химическое, название). При кристаллизации выпадает пиросернистокислый натрий (Na2S2O5), который называют также метабисульфитом. Все три названия — бисульфит, пиросульфит и метабисульфит — синонимы. Препараты с этими названиями могут быть с равным успехом использованы для определеления фосфора.
V. Натрий сернистокислый безводный, сульфид натрия Na2SO3.
VI. Эйконоген, раствор. Растворяют полностью 6 г бисульфита натрия в 20—25 мл воды, вносят в этот раствор 0,1 г эйконогена (аминонафтолсульфоновой кислоты), который также должен полностью раствориться, на что уходит некоторое время.
VII. Отдельно в небольшом объеме растворяют 1,2 г безводного сернокислого натрия, оба раствора смешивают, доводят объем до 50 мл, дают отстояться несколько часов и фильтруют.
VIII. Калибровочный раствор. Основной калибровочный раствор, содержащий 50 ммоль фосфора в 1 л, готовят, растворяя 702,2 мг высушенного до постоянной массы при температуре 120 °С однозамещенного фосфата калия КН2РО4 в 100 мл воды. Из него готовят рабочие калибровочные растворы, содержащие 1; 2 и 3 ммоль/л. Для этого 1; 2 или 3 мл основного раствора доводят водой до объема 50 мл.