Унифицированный метод определения в эритроцитах
Принцип метода
Эритроциты отделяют центрифугированием, гемолизируют водой и определяют содержание электролитов методом фотометрии пламени. В связи с тем, что между эритроцитами всегда остается некоторое количество плазмы, большое значение имеет единообразие режимов центрифугирования, приведенный ниже режим рекомендован в качестве унифицированного.
Приготовление калибровочных растворов
В качестве исходных используют те же растворы, что и при определении натрия и калия в плазме.
I. Рабочий калибровочный раствор для определения калия в эритроцитах.
В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 3,84 мл исходного калибровочного раствора КСl, содержащего 100 ммоль/л, и доводят объем водой до 100 мл, получается основной калибровочный раствор с концентрацией 3,84 ммоль/л. Из него готовят разведения согласно табл.
Определение электролитов в эритроцитах
|
Раствор KCl 3,84 ммоль/л (мл)
|
Вода (мл)
|
Концентрация калия (ммоль/л)
|
Соответствует содержанию калия в эритроцитах при разведении 1: 260 (ммоль/л)
|
| 7,5 | до 100 | 0,288 | 75 |
| 8,0 | до 100 | 0,308 | 80 |
| 8,5 | до 100 | 0,327 | 85 |
| 9,0 | до 100 | 0,346 | 90 |
| 9,5 | до 100 | 0,365 | 95 |
II. Рабочий калибровочный раствор для определения натрия в эритроцитах.
В мерную колбу вместимостью 1 л вносят 33 мл исходного калибровочного раствора КСl, содержащего 100 ммоль/л, и доводят до 1 л, получается фоновый раствор, содержащий 3,3 ммоль/л КСl. В колбу вместимостью 100 мл вносят 1 мл исходного калибровочного раствора NaCl, содержащего 1000 ммоль/л, и доводят до объема 100 мл фоновым раствором, содержащим 3,3 ммоль/л КСl, получается раствор, содержащий 10 ммоль/л NaCl и 3,3 ммоль/л КСl. Из полученных растворов готовят разведение согласно табл.
Определение натрия в эритроцитах
|
Раствор содержащий 10 ммоль/л KC1 (мл)
|
Фоновый раствор 3,3 ммоль/л KC1 (мл)
|
Концентрация ммоль/л
|
Соответствует содержанию натрия в эритроцитах при разведении 1 : 26 ммоль/л
|
|
|
K
|
Na
|
|||
| 5 | до 100 | 3,3 | 0,5 | 13,0 |
| 6 | до 100 | 3,3 | 0,6 | 15,6 |
| 7 | до 100 | 3,3 | 0,7 | 18,2 |
| 8 | до 100 | 3,3 | 0,8 | 20,8 |
Ход исследования. Кровь для исследования берут с гепарином из расчета 5 мг (650 ЕД) на 1 мл, центрифугируют в течение 15 мин при скорости 3000 об./мин, отсасывают плазму с верхним слоем эритроцитов и снова центрифугируют в течение 30 мин при скорости 3000 об./мин и удаляют верхний слой.
Из упакованного слоя эритроцитов берут пробу, которую разводят водой для определения калия в 260 раз, а для определения натрия — в 26 раз. Пробы сжигают одновременно с калибровочными растворами. Расчет проводят по калибровочному графику.
