Принцип метода основан на том, что салициловая кислота вызывает денатурацию белка (помутнение). Интенсивность помутнения пропорциональна концентрации белка.
Специальное оборудование: фотоэлектроколориметр.
Ход исследования
В связи с высоким содержанием белка в транссудатах и экссудатах их перед исследованием разводят 0,9%-ным раствором натрия хлорида. Степень разведения ориентировочно устанавливают по реакции с сульфосалициловой кислотой. После этого готовят основное разведение выпотных жидкостей 1 : 100, для чего к 0,1 мл экссудата или транссудата добавляют 9,9 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида. При необходимости (большое содержание белка) степень разведения можно увеличить.
В пробирку вносят 1,25 мл разведенной жидкости и 3,75 мл 3%-ного раствора сульфосалициловой кислоты, содержимое перемешивают. Через 5 мин фотометрируют при длине волны 590—650 нм (оранжевый или красный светофильтр) в кювете с длиной оптического пути 0,5 см против контрольной пробы, в которую вместо сульфосалициловой кислоты вносится 3,75 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида.
Расчет производят по калибровочному графику с учетом разведения пробы. Для построения графика из стандартного раствора альбумина готовят разведения и обрабатывают их как опытные пробы.
Построение калибровочного графика
|
№ пробирки
|
Объем стандартного раствора (мл)
|
Объем 0,9 %-ного раствора хлорида натрия (мл)
|
Концентрация белка (мг/мл)
|
| 1 | 0,05 | 9,95 | 50 |
| 2 | 0,1 | 9,9 | 100 |
| 3 | 0,2 | 9,8 | 200 |
| 4 | 0,5 | 9,5 | 500 |
| 5 | 1,0 | 9,0 | 1000 |
Примечание
Прямолинейная зависимость калибровочного графика сохраняется до концентрации белка 1000 мг/мл.
В экссудатах содержится от 30 до 80 г/л белка, тогда как в транссудатах 5—25 г/л.