Унифицированный метод количественного определения белка

Принцип метода основан на том, что салициловая кислота вызывает денатурацию белка (помутнение). Интенсивность помутнения пропорциональна концентрации белка.

Специальное оборудование: фотоэлектроколориметр.

Ход исследования

В связи с высоким содержанием белка в транссудатах и экссудатах их перед исследованием разводят 0,9%-ным раствором натрия хлорида. Степень разведения ориентировочно устанавливают по реакции с сульфосалициловой кислотой. После этого готовят основное разведение выпотных жидкостей 1 : 100, для чего к 0,1 мл экссудата или транссудата добавляют 9,9 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида. При необходимости (большое содержание белка) степень разведения можно увеличить.

В пробирку вносят 1,25 мл разведенной жидкости и 3,75 мл 3%-ного раствора сульфосалициловой кислоты, содержимое перемешивают. Через 5 мин фотометрируют при длине волны 590—650 нм (оранжевый или красный светофильтр) в кювете с длиной оптического пути 0,5 см против контрольной пробы, в которую вместо сульфосалициловой кислоты вносится 3,75 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида.

Расчет производят по калибровочному графику с учетом разведения пробы. Для построения графика из стандартного раствора альбумина готовят разведения и обрабатывают их как опытные пробы.

Построение калибровочного графика

№ пробирки	Объем стандартного раствора (мл)	Объем 0,9 %-ного раствора хлорида натрия (мл)	Концентрация белка (мг/мл)
1	0,05	9,95	50
2	0,1	9,9	100
3	0,2	9,8	200
4	0,5	9,5	500
5	1,0	9,0	1000

Примечание

Прямолинейная зависимость калибровочного графика сохраняется до концентрации белка 1000 мг/мл.

В экссудатах содержится от 30 до 80 г/л белка, тогда как в транссудатах 5—25 г/л.

Далее по теме: