Химическое исследование желчи включает определение концентрации билирубина, холестерина и желчных кислот, вычисление холато-холестеринового индекса (х/х) и др.
Колориметрическим методом по Мейленграхту можно ориентировочно определить концентрацию билирубина. При взаимодействии сульфаниловой кислоты с нитритом натрия образуется диазофенилсульфоновая кислота (диазосмесь), которая дает со связанным (прямым) билирубином сыворотки розово-фиолетовое окрашивание. По его интенсивности судят о концентрации связанного билирубина, дающего прямую реакцию. При добавлении к сыворотке крови кофеинового реактива несвязанный (непрямой) билирубин переходит в растворимое диссоциированное состояние и также дает розово-фиолетовое окрашивание с диазосмесью одновременно с прямым билирубином. По интенсивности окраски, образующейся после добавления кофеинового реактива, определяют концентрацию общего билирубина. По разнице между общим и связанным (прямым) билирубином находят содержание несвязанного (непрямого) билирубина.
В 3 пробирки (для общего билирубина, прямого и для контроля) вводят реактивы в порядке, указанном в табл.
Количество реактивов, участвующих в реакции
|
Ингридиенты мл
|
Билирубин
|
Контроль
|
|
|
общий
|
связанный (прямой)
|
||
| Сыворотка | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Кофеиновый реактив 9% -ный раствор | 1,75 | — | 1,75 |
| NaCl | — | 1,75 | 0,25 |
| Диазосмесь | 0,25 | 0,25 | — |
Для определения прямого билирубина в пробе измерения на ФЭКе производят спустя 5—10 мин после добавления диазосмеси, так как при более длительном стоянии в реакцию вступает непрямой билирубин.
При определении общего билирубина пробу оставляют стоять 20 мин. При дальнейшем стоянии окраска не изменяется.
Контроль на мутность сыворотки ставят для каждого опыта.
Измерение экстинкции производят на ФЭКе при зеленом светофильтре (500—560 нм) против воды в кювете с толщиной слоя в 5 мм. Из показателей общего и прямого билирубина вычитают показатель контроля. Расчет производят по калибровочному графику. Находят содержание общего и прямого билирубина. Для определения непрямого билирубина из общего вычитают прямой билирубин.
Построение калибровочного графика удобно производить с помощью набора «Билирубин-эталон» (фирма «Лахема», Чехия). Набор содержит лиофилизированный (сухой) билирубин, альбумин и инструкцию по построению графика.
Результаты выражают в миллиграммах на литр. Для этого концентрацию билирубина, найденную по графику, умножают на 2000, так как для исследования было взято 0,5 мл сыворотки. Коэффициент пересчета в единицы СИ (мкмоль/л) равен 1,7104. В норме содержание общего билирубина — 8,5—20,5 мкмоль/л.
По соотношению концентрации билирубина в порциях С и В судят о концентрационной способности желчного пузыря (с учетом возможности снижения ее в порции В при разведении желчи воспалительным экссудатом). В норме в порции В содержится 3,4—6,8 ммоль/л (200—400 мг%), а в порции С — 0,17—0,34 ммоль/л (10—20 мг%) билирубина.