Ход определения
Опытная проба: в пробирки вносят по 1 мл субстратно-буферного раствора, прогревают при температуре 37 °С в течение 5 мин, затем добавляют по 0,1 мл сыворотки. Содержимое пробирок перемешивают и инкубируют в течение 30 мин при температуре 37 °С. После инкубации пробирки переносят в водяную баню со льдом, а затем добавляют по 10 мл 0,02 моль/л раствора едкого натра и тщательно перемешивают. Через 5 мин пробы измеряют на ФЭК при длине волны 400—420 нм (фиолетовый светофильтр) в кювете с толщиной слоя в 1 см против холостой пробы. Холостую пробу ставят так же, как опытную, но сыворотку добавляют после инкубации.
Расчет производят по калибровочному графику.
Построение калибровочного графика. Из рабочего калибровочного раствора готовят ряд разведений, как указано ниже, и измеряют оптическую плотность растворов при условиях, аналогичных опытным, против 0,02 моль/л раствора едкого натра.
Исследование активности щелочной фосфатазы
|
№ пробирки
|
Рабочий калибровочный раствор (мл)
|
Содержание n-нитрофенола (мкмоль)
|
0,02 моль/л раствор NaOH (мл)
|
Активность ЩФ нмоль/(с∙л)
|
| 1 | 1 | 0,05 | 10,1 | 278 |
| 2 | 2 | 0,1 | 9,1 | 556 |
| 3 | 3 | 0,15 | 8,1 | 834 |
| 4 | 5 | 0,25 | 6,1 |
1390 |
| 5 | 7 | 0,35 | 4,1 | 1946 |
Клинико-диагностическое значение
Увеличение активности встречается при повышенном метаболизме в костной ткани: при заживлении переломов, при первичном и вторичном гиперпаратиреодизме (с явным вовлечением скелета), остеомаляции, недостатке витамина D в пище, заболеваниях костей.