В 3 пробирки (2 опытные пробы и холостая) вводят реактивы, как указано в таблице.
Диазореакция
|
Ингридиенты
|
Опытная проба мл
|
Холостая проба мл
|
|
|
Общий билирубин
|
Связанный билирубин
|
||
| Сыворотка |
0,5
|
0,5
|
0,5
|
| Кофеиновый реактив |
1,75
|
—
|
1,75
|
| Раствор хлорида натрия |
—
|
1,75
|
0,25
|
| Диазосмесь |
0,25
|
0,25
|
—
|
Для определения связанного билирубина измерение проводят спустя 5—10 мин после добавления диазосмеси, так как при длительном стоянии в реакцию вступает несвязанный билирубин. Для определения общего билирубина пробу для развития окраски оставляют стоять 20 мин, после чего измеряют на фотометре. При дальнейшем стоянии окраска не изменяется.
Измерение проводят при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя в 0,5 см против воды. Из показателей, полученных при измерении общего и связанного билирубина, вычитают показатель холостой пробы.
Расчет производят по калибровочному графику. Находят содержание общего и связанного билирубина.