Опытная проба: к 0,1 мл сыворотки прибавляют 5 мл рабочего раствора биуретового реактива и смешивают, избегая образования пены. Через 30 мин (и не позднее чем через 1 ч) измеряют на фотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы.
Холостая проба: к 5 мл рабочего биуретового реактива прибавляют 0,1 мл 154 ммоль/л раствора хлорида натрия, далее обрабатывают как опытную пробу.
Расчет ведут по калибровочному графику.
Построение калибровочного графика: из калибровочного раствора готовят рабочие растворы как указано в таблице.
Приготовление калибровочного раствора
|
№
|
Компоненты
|
Пробы
|
||
|
опытная
|
холостая
|
калибровочная
|
||
| 1 | 10 мл мочи + 100 мг аскорбиновой кислоты | 1,5 | 1,5 | — |
| 2 | Реактив Эрлиха | — | 1,5 | — |
| 3 | Насыщенный раствор ацетата натрия | — | 3,0 | — |
| 4 | Смесь компонентов 2 и 3 в соотношении 1:2 | 4,5 | — | — |
| 5 | Рабочий калибровочный раствор | — | — | 6,0 |
Из каждого разведения берут по 0,1 мл рабочего раствора и прибавляют по 5 мл рабочего биуретового реактива, через 30—60 мин измеряют на фотометре, как в опыте против холостой пробы. По полученным данным строят калибровочный график. Калибровочная кривая линейна до 100 г/л альбумина.
Нормальные величины: 65—85 г/л (6,5—8,5 г на 100 мл).