Биохимические методы исследования в клинической лабораторной диагностике
В клинико-диагностических лабораториях при исследовании показателей обмена используются фотометрические приборы. Приборы проводят фотометрическое детектирование результатов: энергия светового потока измеряется с помощью фотодетектора, преобразующего световую энергию в электрический сигнал. Фотометрические методы анализа делятся на следующие: абсорбционный (поглощение раствором световой энергии); нефелометрический (рассеяние световой энергии дисперсной средой); флуориметрический (излучение раствором световой энергии, вызванной световой энергией возбуждения); рефлектометрия …
Опытная проба: в центрифужную пробирку наливают 0,8 мл воды, 0,2 мл сыворотки и 1 мл 100 г/л раствора трихлоруксусной кислоты, смешивают. Через 15—20 мин центрифугируют. В чистую пробирку вносят 0,5 мл надосадочной жидкости и 5 мл цветного реактива. Пробирку выдерживают на кипящей водяной бане в течение 20 мин, затем охлаждают в течение 2—3 мин под …
Принцип метода Под воздействием НСl разрывается тетрапирроловая связь билирубина и образуются два дипиррола, которые диазотируются диазобензосульфоновой кислотой с образованием розово-фиолетового азобилирубина. Связанный билирубин реагирует быстро, несвязанный билирубин реагирует после добавления кофеинового реактива. Необходимые реактивы I. Кофеин. II. Натрия бензоат. III. Натрия ацетат 3-водный. IV. Кофеиновый реактив: 5 г кофеина, 7,5 г бензоата натрия, 12,5 г …
Каждый из используемых в лабораториях фотометров имеет следующие характеристики: спектральный диапазон — длины волн, в которых работает прибор. В большинстве случаев фотометры работают в спектральном диапазоне 340—700 нм; динамический диапазон измерения. Обычно диапазону оптических плотностей от 0 до 2 соответствует диапазон по светопропусканию от 100 до 1%; максимальный и минимальный объем фотометрируемого раствора. Эти объемы …
Принцип метода Мочевина под действием уреазы разлагается на углекислый газ и аммиак, который в щелочной среде с гипохлоритом натрия и фенолом образует индофенол синего цвета (метод Бертло). Светопоглощение образовавшегося продукта пропорционально содержанию мочевины в образце. Необходимые реактивы I. Уреаза. Для определения пригодна уреаза с активностью > 5 МЕ/мг. II. Этилендиамин-N, N, N, N-тетрауксусной кислоты динатриевая …
В 3 пробирки (2 опытные пробы и холостая) вводят реактивы, как указано в таблице. Диазореакция Ингридиенты Опытная проба мл Холостая проба мл Общий билирубин Связанный билирубин Сыворотка 0,5 0,5 0,5 Кофеиновый реактив 1,75 — 1,75 Раствор хлорида натрия — 1,75 0,25 Диазосмесь 0,25 0,25 — Для определения связанного билирубина измерение проводят спустя 5—10 мин после …
На качество проводимых в лаборатории исследований существенное влияние оказывает аккуратное и точное выполнение операций дозирования. Основными режимами дозирования являются: прямое дозирование, обратное дозирование, многократное дозирование, разведение. Лабораторные дозирующие устройства подразделяются на пипеточные, клапанные, перистальтические дозаторы. Пипеточные механические дозаторы появились в лабораториях в 1960-е гг. и значительно повысили точность, воспроизводимость дозирования, снизили риск развития профессиональных заболеваний. …
Специальное оборудование: спектрофотометр или колориметр с кюветой для микроизмерений; полуавтоматические микропипетки. Ход определения Перед определением сыворотку разводят 0,154 моль/л раствором хлорида натрия в отношении 1 : 9. Опытная проба: 100 мкл рабочего раствора уреазы вносят в пробирку, добавляют 20 мкл разведенной сыворотки. Закрывают пробкой, перемешивают и инкубируют в течение 15 мин при температуре 37 °С. …
Способ I — Шелонга-Вендес использованием стабилизирующего свойства белка сыворотки крови. Основной раствор билирубина: в колбе вместимостью 50 мл растворяют 40 мг билирубина в 30—35 мл 0,1 моль/л раствора карбоната натрия Na2CO3. Хорошо взбалтывают, не допуская образования пузырьков. Доводят до 50 мл 0,1 моль/л раствором Nа2СО3 и несколько раз перемешивают. Раствор стоек только в течение 10 …
Центрифугирование проводит разделение смесей, состоящих из двух или нескольких компонентов с разной удельной плотностью. Разделение частиц с помощью центрифугирования основано на разной скорости осаждения частиц в центробежном поле. В лабораторной практике чаще всего применяют препаративное центрифугирование, основанное на различиях в скорости седиментации частиц, отличающихся друг от друга плотностью и размерами. Разделяемый материал (в лабораториях это …
