Исследование антител
Для клиники наиболее важно исследование антител антирезус, которые являются основной причиной пост-трансфузионных осложнений и гемолитической болезни новорожденных. Меньший практический интерес представляет определение естественных изоагглютининов ар и иммунных антител анти-А, анти-В.
Метод исследования антител зависит от их вида (изосерологического класса). Если вид антител не известен, то исследование их необходимо проводить всеми методами, регламентированными действующими положениями.
Причиной посттрансфузионных осложнений и биологического конфликта в подавляющем большинстве случаев бывает резус-фактор (антиген D). В связи с этим в клинической практике приходится встречаться с антителами антирезус (антителами анти-D).
Для их выявления необходимо иметь стандартные эритроциты резус-положительного фенотипа, т. е. содержащие антиген D. При определении наличия и титра антител анти-D присутствием в эритроцитах антигенов С, Е и других пренебрегают.
Стандартные резус-отрицательные эритроциты, используемые для определения антител антирезус, должны быть только фенотипа cde, т. е. в них не должно быть трех основных факторов системы резус — С, D и Е.
Ниже приводятся методики, по которым определяются в исследуемых сыворотках наличие и титр антител анти-D.
Этими же методиками можно исследовать антитела анти-С и анти-Е, для определения которых необходимы стандартные эритроциты соответствующего фенотипа.
«Организационно-практические вопросы службы крови»,
Л.В.Иванов
Оснащение, которое необходимо для данной методики, перечислено в соответствующем разделе (комплект «Резус»).Помимо него применяются: сыворотка-разводитель для титрования; стандартные резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты. В качестве разводителя используется специально отобранная гемагглютинирующая сыворотка группы AB(IV), которая не должна вызывать неспецифической агглютинации резус-отрицательных эритроцитов и подавлять реакции с резус-положительными эритроцитами. Применение для титрования гемагглютинирующей сыворотки группы AB(IV), выпускаемой в …
Реакция конглютинации на чашках Петри При данной реакции ложный положительный результат в основном обуславливается свойствами плазмы (сыворотки) или эритроцитов крови обследуемых лип, страдающих злокачественными новообразованиями, заболеваниями крови, некоторыми хроническими гнойно-воспалительными процессами. Для дифференцирования ложной положительной реакции необходимо ставить контроль на аутоагглютинацию исследуемых эритроцитов в собственной сыворотке. Ложный положительный результат, вызванный панагглютинирующими свойствами исследуемых эритроцитов, можно …
Определение антител антирезус и их титра разделяется практически на два самостоятельных этапа. Оба исследования могут проводиться одновременно, что не меняет их существа. Для определения неполных антител антирезус на чашках Петри надписываются номера, которым соответствуют пробирки с кровью обследуемых лиц. Под каждым номером на чашку Петри из пробирки с таким же номером наносится в три точки, …
Ложный отрицательный результат отмечается в основном при: отклонении от регламентированного температурного интервала; нарушениях соотношения эритроцитов и стандартных сывороток; сокращении времени инкубации на водяной бане; использовании для исследования старых эритроцитов; применении недоброкачественных стандартных сывороток. При исследовании титра антител причиной ложного отрицательного результата может быть исследуемая сыворотка, активность антител которой снизилась или исчезла вследствие длительного или неправильного …
Результат определения антител антирезус учитывается только в том случае, если исследуемая сыворотка не дает неспецифической реакции с собственными и стандартными резус-отрицательными эритроцитами. Причины ложных положительных и отрицательных результатов изложены в соответствующем разделе. Если антитела антирезус в сыворотке невозможно определить из-за сильно выраженной панагглютинации, то целесообразно произвести титрование исследуемой сыворотки. В результате происходит разведение исследуемой сыворотки, …
При этом методе исследования ложный положительный результат, как правило, не наблюдается, так как в ходе реакции вводится изотонический раствор хлористого натрия. Ложный отрицательный результат могут вызывать те же причины, что и в реакции конглютинации на чашках Петри, а также потеря желатиной конглютинирующих свойств. Метод агглютинации в солевой среде Причины ложноположительных и ложноотрицательных реакций, а также …
Исследуемая сыворотка и стандартные эритроциты подготавливаются в изложенном выше порядке. При данном методе исследования в процессе реакции необходимо вводить 10% раствор желатины. Как и при чашечном методе, определение антител антирезус и их титра представляет две самостоятельные операции. В зависимости от условий работы оба исследования могут проводиться одновременно или порознь. Определение неполных антител антирезус В штатив …
При определении антител антиглобулиновыми пробами Кумбса ложный положительный результат отмечается очень редко, обуславливается преимущественно бактериальным загрязнением исследуемой сыворотки (при определении антител) или эритроцитов (при исследовании антигенов), а также потерей по различным причинам специфичности антиглобулиновой сывороткой Кумбса. Ложный отрицательный результат возникает преимущественно вследствие недоброкачественной отмывки эритроцитов (до и после инкубации), плохой подготовки посуды (пробирок, пластин, пипеток …
Стандартные резус-положительные эритроциты предназначены для выявления в исследуемой сыворотке антител антирезус, стандартные резус-отрицательные эритроциты — для контроля исследуемой сыворотки на панагглютинацию, которая может имитировать присутствие антител антирезус. Содержимое пробирки перемешивается встряхиванием штатива, который помещается на 10 мин на водяную баню. По окончании инкубации во все пробирки добавляется доверху физиологический раствор хлористого натрия, подогретый до температуры …
В штатив устанавливаются рядами в соответствии с числом исследуемых образцов сывороток пробирки с обозначениями степени разведения от 1:2 до 1 : 512. Во все пробирки вносится по две капли физиологического раствора хлористого натрия, который в этом случае играет роль разводителя. В первую пробирку этой же пипеткой (!) вносится две капли исследуемой сыворотки. Содержимое пробирки тщательно …
