Методы исследования пигментного обмена
В основе образования билирубина лежит деградация гема гемоглобина и других гемсодержащих белков и ферментов. Гем распадается до биливердина, который восстанавливается в билирубин. Свободный билирубин токсичен, нерастворим в воде и циркулирует в крови в комплексе с альбуминами. Этот билирубин дает непрямую реакцию Ван ден Берга (после осаждения альбуминов спиртом), поэтому называется непрямым. Непрямой билирубин, будучи связанным …
Билирубин вступает в реакцию азосочетания с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием раствора азокрасителя. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию билирубина и выявляется фотометрически. Оригинальным методом Ван ден Берга устанавливается лишь характер реакции (прямая, непрямая, замедленная), т.е. отмечается преобладание в сыворотке крови того или иного билирубина. Метод Ендрассика, Клеггорна и Грофа дает возможность фракционно определять содержание билирубина. Он …
Принцип метода Под воздействием НСl разрывается тетрапирроловая связь билирубина и образуются два дипиррола, которые диазотируются диазобензосульфоновой кислотой с образованием розово-фиолетового азобилирубина. Связанный билирубин реагирует быстро, несвязанный билирубин реагирует после добавления кофеинового реактива. Необходимые реактивы I. Кофеин. II. Натрия бензоат. III. Натрия ацетат 3-водный. IV. Кофеиновый реактив: 5 г кофеина, 7,5 г бензоата натрия, 12,5 г …
В 3 пробирки (2 опытные пробы и холостая) вводят реактивы, как указано в таблице. Диазореакция Ингридиенты Опытная проба мл Холостая проба мл Общий билирубин Связанный билирубин Сыворотка 0,5 0,5 0,5 Кофеиновый реактив 1,75 — 1,75 Раствор хлорида натрия — 1,75 0,25 Диазосмесь 0,25 0,25 — Для определения связанного билирубина измерение проводят спустя 5—10 мин после …
Способ I — Шелонга-Вендес использованием стабилизирующего свойства белка сыворотки крови. Основной раствор билирубина: в колбе вместимостью 50 мл растворяют 40 мг билирубина в 30—35 мл 0,1 моль/л раствора карбоната натрия Na2CO3. Хорошо взбалтывают, не допуская образования пузырьков. Доводят до 50 мл 0,1 моль/л раствором Nа2СО3 и несколько раз перемешивают. Раствор стоек только в течение 10 …
Примечание На правильность метода влияет способ построения калибровочной кривой. Ряд веществ — гидрокортизон, андрогены, эритромицин, глюкокортикоиды, фенобарбитал, аскорбиновая кислота — вызывают интерференцию. Клинико-диагностическое значение При печеночных желтухах (гепатиты, циррозы) в крови отмечается резкое увеличение содержания билирубинглюкуронида, происходящее главным образом от разрушения печеночных клеток. Повреждение мембран гепатоцитов приводит к выходу в кровь и прямого, и непрямого …
