Биохимические методы исследования эякулята (II)

Для определения фруктолиза производят повторное исследование через 2 ч по указанной выше методике. Разница между первым и вторым исследованиями показывает величину фруктолиза.

Лимонная кислота образуется в предстательной железе. В норме концентрация лимонной кислоты в семенной жидкости может служить своеобразным «андрологическим эквивалентом» эндокринной функции яичек. Концентрация лимонной кислоты в эякуляте служит также показателем функционального состояния предстательной железы. В норме концентрация лимонной кислоты в семенной жидкости колеблется от 20 до 30 ммоль/л. При простатите концентрация лимонной кислоты может значительно уменьшаться.

Ход определения. Определение лимонной кислоты начинают с осаждения белков. В колбочке на 25—50 мл или в широкой сахарной пробирке к 0,4 мл эякулята добавляют 7,6 мл дистиллированной воды и 4 мл 60 % трихлоруксусной кислоты, встряхивают в течение 10 мин. При необходимости колбочку с содержимым можно оставить при комнатной температуре до следующего Дня. Смесь фильтруют.

Фильтрат должен быть прозрачным. К 3 мл фильтрата добавляют 1 мл 15н. раствора серной кислоты; 0,8 мл 0,3 М калия перманганата; 0,2 мл 1 М калия бромида, тщательно перемешивают и оставляют на 15 мин в натяжном шкафу. Затем избыток калия перманганата удаляют прибавлением 0,5 мл 1,5 М натнитрата и в полученную бесцветную жидкость освобождения от избытка натрия нитрата доливают 0,5 мл 2 М раствора мочевины.

Обесцвеченные пробы переводят в делительные воронки, туда же вливают 10 мл петролейного эфира или гексана. При встряхивании в течение мин экстрагируют пентабромацетон — продукт окисления лимонной кислоты. Нижний слой слить и также при встряхивании реакционную есть промывают 5 и 3 мл дистиллированной воды. В промытый петролейный эфир добавляют 5 мл реактива из натрия сульфида в этиленгликоле. После добавления реактива жидкость встряхивают еще в течение 1 мин.

Через 10 мин окрашенную жидкость сливают и определяют оптическую плотность на ФЭК, используя светофильтр с длиной волны пропускания около 430 нм. Расчет производят по калибровочной кривой. Для ее построения из стандартного раствора лимонной кислоты берут такие количества, которые содержат от 100 до 500 мкг, разливают в пробирки по 3 мл. Далее определение лимонной кислоты ведут, как и в фильтрате эякулята после осаждения белков [Базарнова М. А. и др., 1979].

«Руководство по андрологии», ВН Ткачук

Далее по теме: